牦牛大肠埃希氏菌疫苗保存12个月抗体效价测定

大肠杆菌病是引起西藏各种牛生产性能下降的一种传染病，2005年7月至2007年1月，我们选用在西藏自治区分离的牦牛大肠杆菌病原株(9903，中国兽药监察所鉴定)，精心研制出符合当地特征的牦牛大肠埃希氏菌病灭活疫苗4批；批号200401、200501、200502、200503；批量3600mL/批，并对保存了3、6、9、12个月的每批疫苗对家兔进行抗体效价测定，观察本疫苗保存3、6、9、12个月后对家兔的免疫效力。
1材料和方法
(1)疫苗：牦牛大肠埃希氏菌病灭活疫苗4批，批号200401、200501、200502、200503。疫苗保存3、6、9、12个月进行抗体效价测定试验。
(2)试验动物：选105－120日龄、体重1.70－2.60kg的兔40只。
(3)阳性血清：大肠埃希氏菌阳性血清。由中国兽医药品监察所细菌制品检测室提供。
(4)抗原：牦牛大肠埃希氏菌甲醛灭活抗原，批号200502；批量300ml/批。
(5)被检兔血清：4批疫苗在4℃保存3、6、9、12个月分别接种兔5只，从兔耳静脉采血分离血清。
(6)阴性血清：每次5只对照兔从耳静脉采血分离血清。
(7)器材：“V”型96孔微量凝集板、移液器、吸头、微量振荡器、0.5％石炭酸生理盐水等。
(8)具体方法：将4批疫苗4℃保存3、6、9、12个月分别接种试验兔，每批接种5只。初次接种疫苗0.5mL/只，14d再次接种疫苗1.0mL/只。每次设5只对照兔，注射肉汤，其剂量和方法与试验兔相同。疫苗接种前和再次接种疫苗后21d分别在试验和对照兔耳静脉采血，用微量凝集试验检测抗体效价，观察疫苗保存期抗体消长情况。
(9)抗体效价测定0－51：将试验兔血清分别在“V”型96孔微量凝集板中进行。从A排开始加入稀释液0.5％石炭酸生理盐水，每孔加入50uL；然后在A排第1孔中加入被检牦牛血清50uL，混合后，从第1孔吸50uL，加入到第2孔，依次作1：2、1：4、1：8、1：16、1：32……倍比稀释，然后各孔加入批号200502的甲醛灭活抗原501，LL。血清对照：大肠埃希氏菌阳性和阴性血清同试验兔血清的作法。抗原对照：50uL甲醛灭活抗原+50uL0.5％石炭酸生理盐水。将试验与对照均置37℃温箱作用2－4h，放置室温过夜判定结果。
(10)具体步骤：4批疫苗→分别保存3、6、9、12个月→分别接种兔→初次免疫接种疫苗0.5mL→14d再次免疫接种疫苗1.0mL→再次接种后2ld→采血测抗体效价→观察疫苗保存期抗体消长情况。
2试验结果
(1)200401疫苗在4℃保存3、6、9、12个月分别接种兔5只。并设对照组5只。通过试验证明200401疫苗抗体效价在家兔最高为3.311，最低到2.709。通过家兔攻毒保护试验，抗体效价为2.709以上的兔攻毒保护。同时发现200401疫苗在3、6、9个月抗体效价最好。随保存期时间的延长，出现逐渐递减的趋势。
(2)200501疫苗在4℃保存保存3、6、9、12个月分别接种兔5只，并设对照组5只，通过试验证明200501疫苗抗体效价在家兔最高为3.612，最低到2，709。通过家兔攻毒保护试验，抗体效价为2.709以上的兔攻毒保护。同时发现200501疫苗在3个月时抗体效价最好，随保存时间的延长，出现逐渐递减的趋势。发现第5组兔的抗体效价没有出现递减的情况。
(3)200502疫苗在4℃保存保存3、6、9、12个月分别接种兔5只，并设对照组5只，通过试验证明200502疫苗抗体效价在家兔最高为3.612。最低到2.709。通过家兔攻毒保护试验，抗体效价为2.709以上的兔攻毒保护。同时发现200502疫苗在3、6个月抗体效价最好，随保存时间的延长，出现逐渐递减的趋势。
(4)200503疫苗在4℃保存3、6、9、12个月分别接种兔5只，并设对照组5只，通过试验证明200503疫苗抗体效价在家兔最高为3.311，最低到2.709。通过家兔攻毒保护试验，抗体效价为2.709以上的兔攻毒保护。同时发现200503疫苗在3、6、9个月抗体效价最好。随保存时间的延长，出现逐渐递减的趋势。发现第4组家兔的抗体效价没有出现递减的情况。
3分析与讨论
(1)牦牛大肠埃希氏菌灭活疫苗主要用来免疫牦牛，来抵抗大肠埃希氏菌病对牦牛的攻击，我们用4批牦牛大肠埃希氏菌病灭活疫苗。保存3、6、9、12个月后，分别接种家兔，观察对家兔的免疫效力，通过试验证明大肠杆菌阳性血清效价在家兔最高为3.612，最低到2.709。通过家兔攻毒保护试验，抗体效价为2.709以上的兔攻毒保护，表明对试验家兔也有一定的免疫效果。
(2)通过试验发现4批疫苗在3、6个月抗体效价最好，随保存时间的延长，出现逐渐递减的趋势。
(3)不同的家兔由于个体体质及体重的差异，出现抗体效价的一定差异性。