高效液相色谱法测定妇月康软胶囊中阿魏酸的含量-医学论文

　　妇月康软胶囊是由当归、川芎、红花、桃仁等8味中药组成[1]，本品具有活血化淤、调经止痛等功效，可用于产后恶露不行、少腹疼痛、盆腔炎、慢性附件炎、阴道炎，也可试用上节育环后引起的阴道流血、月经过多。妇月康软胶囊是经妇月康胶囊改型而来，妇月康胶囊收载入《中药成方制剂》第15册，该标准无含量测定项。当归、川芎为本方主药，且其均含阿魏酸等有效成分[2-3]，故本文在选择该品质量控制的定量指标时，选择了阿魏酸，并建立了高效液相色谱法测定其含量的控制方法。

　　1 仪器与试药

　　Waters高效液相色谱系统（Waters 515泵，Waters 2487双波长紫外检测器）。阿魏酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号：0773-9809，供含量测定用）；妇月康软胶囊（广东罗浮山药业有限公司提供，批号：070211）；水为纯化水，甲醇为色谱纯，醋酸等均为分析纯。

　　2 方法与结果

　　2.1 色谱条件

　　色谱柱：Hypersil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇-1％醋酸溶液（32∶68）；检测波长：320 nm；流速：1.0 mL/min；进样量：10 μL。

　　2.2 对照品溶液的制备

　　精密称取阿魏酸对照品适量，加甲醇-甲酸（100∶1）的混合溶液制成每毫升含0.02 mg的溶液，即得。

　　2.3 供试品溶液的制备

　　取装量差异项下的本品内容物，研匀，取2.0 g，精密称定，置具塞三角瓶中，精密加入甲醇-甲酸（100∶1）的混合溶液100 mL，密塞，称定重量，超声处理30 min（功率220 W，50 Hz），放冷后称定其重量，用100∶1的甲醇-甲酸混合溶液补足减失的重量，振摇均匀，滤过，即得。

　　2.4 线性关系考察

　　精密称取阿魏酸对照品7.53 mg，置于250 mL的容量瓶中，用甲醇-甲酸（100∶1）溶解并稀释至刻度，摇匀，制成浓度为0.030 08 mg/mL的溶液；精密量取上述溶液10 mL，置于100 mL的容量瓶中，用甲醇-甲酸（100∶1）稀释至刻度，摇匀，制得浓度为0.003 008 mg/mL的溶液。分别精密吸取上述两种溶液5、10、20 μL，注入液相色谱仪，按《中国药典》2010年版附录高效液相操作方法操作，测得峰面积积分值，并以进样浓度（X）为横坐标，峰面积积分值（Y）为纵坐标，绘制标准曲线，结果得到阿魏酸回归方程：Y = 11 899 698.421 3 X - 24 086.787 1（r = 1.000 0，n = 6）。阿魏酸在0.015~0.600 μg范围内，与峰面积有良好的线性关系。

　　2.5 阴性对照试验

　　照本品处方工艺，取除当归、川芎外的药材，按本品规定的制备工艺要求，制成缺当归、川芎的妇月康软胶囊内容物，再按本文规定的供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。精密吸取对照品溶液、阴性对照溶液和供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，记录色谱峰，在与对照品色谱相应的位置上（tR = 6.15 min）阴性对照无干扰。见图1。

　　2.6 重现性试验

　　取同一批号的样品5份，分别按本文所述方法测定含量，结果测得样品中阿魏酸的平均含量为0.09 mg/粒，RSD=2.22%。

　　2.7 精密度试验

　　精密吸取阿魏酸对照品溶液10 μL，按本文所述方法重复进样5次，测得峰面积的RSD = 0.038％。

　　2.8 稳定性试验

　　精密吸取同一供试品溶液，按本文所述方法测定，在0、4、8、12 h分别进样10 μL，平均峰面积为862 703，RSD = 0.294 0%，表明供试品溶液在12 h内稳定性良好。

　　2.9 加样回收率试验

　　采用加样回收法，精密称取已知含量的妇月康软胶囊（含量为0.090 mg/粒，平均胶囊重为0.997 8 g）1.0 g，共5份，分别精密加入阿魏酸对照品溶液（浓度为0.35 mg/mL）1 mL，按本文规定的供试品溶液制备方法制备后测定。结果见表1。 

　　表1 加样回收率测定结果

　　2.10 样品含量测定

　　依法测定样品（批号：070211）5次。结果见表2。

　　3 讨论

　　本文经对阿魏酸对照品溶液进行紫外全波长扫描，结果阿魏酸在320 nm处有最大吸收，结合有关文献资料，选择320 nm作为测定波长[1-2]。通过对甲醇-0.1％磷酸（30∶70）、乙腈-1％磷酸溶液（25∶75）、甲醇-1%醋酸（32∶68）、乙腈-5％冰醋酸（25∶75）、甲醇-1%醋酸（32∶68）等多种流动相进行比较，发现流动相甲醇-1%醋酸（32∶68）系统分离度好，柱效高[4-5]，故选择其为本文流动相。根据文献报道[6]，阿魏酸的提取方法有用索氏提取器提取、回流提取和超声提取，经对比，三种方法均能将阿魏酸提取完全，但超声提取方法简单，容易操作，重现性好，时间短，故选择超声提取30 min。文献报道可采用甲醇、甲醇-甲酸、乙醇为溶媒进行提取[7]，因此，供试品溶液的制备比较了甲醇、甲醇-甲酸（100∶1）超声提取和2%的碳酸钠溶液超声提取后用盐酸调节pH值至酸性后用乙醚振摇提取，结果显示，样品中阿魏酸含量以甲醇-甲酸（100∶1）超声提取最高，以甲醇超声提取最低。阿魏酸是弱有机酸，容易在溶液中产生解离[8-9]，解离常数和解离平衡容易受到环境的影响，同时考虑到实际中阿魏酸制剂含量测定结果时有偏差，本文重点考察了对照品分别用甲醇和甲醇-甲酸（100∶1）溶解的稳定性和样品的含量，结果表明直接用甲醇为溶媒制备对照品溶液，稳定性较差，样品含量较低，故采用甲醇-甲酸（100∶1）为溶媒制成对照品溶液。

　　综上所述，本法简便、灵敏、准确，可用于妇月康软胶囊的质量控制。