HPLC法测定盐酸丙卡特罗口服溶液含量研究

  盐酸丙卡特罗是一种高效β2受体激动剂，可快速舒张支气管（起效迅速、作用持久），具有显著的平喘效果，临床用于治疗哮喘等呼吸道疾病，疗效确切。常用于治疗小儿肺炎等呼吸系统疾病，常与盐酸氨溴索等药物联用。目前，盐酸丙卡特罗口服溶液的法定含量测定标准仅见于“国家食品 药品监督管理总 局标准YBH06672005”，该方法及文献报道的HPLC法均需使用乙醚和/或氯仿多次萃取样品，并采用内标法计算含量。虽然这些方法可行，但操作繁琐复杂，易引入误差。本研究通过优化色谱条件，建立了更简便的测定方法：样品仅需稀释过滤即可进样分析，采用外标法定量。新方法不仅大幅简化了操作流程，提高了工作效率，还避免了有毒有机溶剂的使用，降低了实验人员的健康风险，为盐酸丙卡特罗口服溶液的质量控制提供了更优的检测方案。
　　一、仪器与试药
　　采用Agilent1220高效液相色谱仪（配紫外检测器）。盐酸丙卡特罗对照品购自中检院；口服溶液为自制（60ml:0.3mg，批号20230501）。乙腈（色谱纯，Tedia）、辛烷磺酸钠（离子对色谱纯，天津光复）、三乙胺（分析纯，南京化学试剂）均为市售。
 　 二、实验方法与结果
　　（一）色谱条件
　　色谱条件：C18色谱柱（4.6×250mm，5μm），流动相A为0.87g/L辛烷磺酸钠（pH6.5）-乙腈（74:26），B为乙腈；梯度程序：0-15min100%A，16-20 min 50%A，21 min恢复100%A。检测波长254 nm，柱温35℃，流速1.0mL/min，进样量20μL。
　　（二）溶液的制备
　　供试品制备：精密量取样品10mL，用10%甲醇稀释至50 mL，滤过后取续滤液备用。空白辅料按同法处理。对照品溶液：精密称取对照品，以10%甲醇溶解并定容至5μg/mL，滤过即得。
 　 （三）专属性实验
　　按“2.1”项下的色谱条件，精密量取供试品溶液、空白辅料溶液和对照品溶液各20μl，依法测定。结果显示，丙卡特罗出峰时间约为7.2min，空白辅料溶液无干扰峰，表明辅料对主成分测定无影响，且丙卡特罗峰与辅料峰分离效果良好（分离度〉1.5），方法专属性符合要求。
　　（四）线性与范围试验
　　精密配制盐酸丙卡特罗系列浓度溶液（0.004、0.2、0.8、1.0、1.2μg/mL），经HPLC测定后建立标准曲线。结果显示，在0.004-1.238μg/mL范围内，峰面积（Y）与浓度（X）呈良好线性关系，回归方程为Y=70.931X-0.1176（R2=0.9996，n=5），线性范围符合检测要求。
　　（五）重复性试验
　　平行测定6份同批次样品，测得含量平均值为99.88%，RSD为1.02%，表明方法重复性良好。
　　（六）重现性试验
　　由不同人员、在不同日期和实验室测定同批次样品6次，结果平均值为100.88%，RSD为0.12%，重现性符合要求。
　　（七）定量限
　　以信噪比S/N≈10计算，定量限为0.041ng（相当于供试品溶液浓度的0.004%），灵敏度满足检测需求。
 　 （八）回收率试验
　　按低、中、高浓度（0.91、1.14、1.37μg）各3份测定，结果如下

　  三、讨论
　　（一）色谱条件的选择
　　当前，《英国药典》《美国药典》《欧洲药典》等均未收载盐酸丙卡特罗口服溶液，仅《中国药典》2020年版收载了原料药、胶囊剂和片剂，《日本药典》第15版收载了原料药。这些药典方法（《中国药典》采用C18柱，磷酸盐缓冲液-甲醇为流动相；《日本药典》采用C18柱，戊烷磺酸钠-甲醇为流动相）均未考虑口服溶液中矫味剂、防腐剂等辅料对主峰的干扰。实验证实，这些辅料会严重影响丙卡特罗的测定。因此，现有标准方法（如YBH06672005）和文献方法均需先用氯仿/乙醚萃取去除辅料，再行HPLC分析，操作繁琐且易产生误差。本研究基于《日本药典》方法进行优化，建立了新的HPLC检测方法：采用改良的色谱条件，样品仅需稀释过滤即可直接进样，无需有机溶剂萃取。新方法不仅简化了操作流程，提高了检测效率，还避免了有毒试剂的使用，更具实用性和安全性。
　　（二）流动相的优化
　　本研究初期参照《中国药典》2020年版方法，发现存在主成分与辅料色谱峰共洗脱问题，调整流动相配比未能改善分离效果。随后尝试《日本药典》15版方法，分离度虽有提升但仍未达标。经系统筛选不同离子对试剂（包括己烷磺酸钠、庚烷磺酸钠及辛烷磺酸钠等），最终确定0.87g/L辛烷磺酸钠体系能实现主峰与辅料的有效分离，且保留时间适中。后续优化中，将甲醇改为乙腈显著改善了峰形，通过调节pH至6.5并升高柱温至35℃，进一步提升了色谱分离性能，最终建立了满足分析要求的色谱条件。
　　四、结论
　　本研究成功建立了一种简便、高效且环保的HPLC法，用于测定盐酸丙卡特罗口服溶液的含量。通过优化色谱条件，采用辛烷磺酸钠-乙腈梯度洗脱系统，实现了主成分与辅料的有效分离，避免了传统方法中有毒溶剂的使用，显著提升了检测效率和安全性。方法学验证表明，该方法线性关系良好（R2=0.9996）、灵敏度高（定量限0.041ng）、回收率稳定（101.66%），且重现性优异（RSD≤1.02%），为盐酸丙卡特罗口服溶液的质量控制提供了可靠的技术支持。未来研究可进一步探索该方法在其他复方制剂或不同剂型中的适用性，并尝试结合自动化前处理技术以进一步提升检测通量。此外，基于绿色化学理念，开发更低毒性的替代流动相或新型检测技术（如UPLC-MS）也是值得关注的方向，以期在保证准确性的同时，进一步减少对环境及实验人员的影响，推动药品质量控制技术的可持续发展。

文章来源：  《安徽科技报》   https://www.zzqklm.com/w/qt/35317.html