蜜中抗生素的含量测定

由于生活水平的提高，蜂蜜常常成为人们关注的对象。更加流行。它不但是很好的天然营养物质，还具有护肤，润肺和消化作用。为了预防蜂病，养蜂人经常使用多种抗生素(氯霉素、链霉素、四环素、土霉素、金霉素、青霉素等)对蜂病进行治疗。

一、蜂蜜中常见抗生素残留研究

（一）氯霉素

由于它具有高效、经济的特点，已广泛应用于蜂病的防治。近年来，欧盟、美国等发达国家禁止在动物性食品中添加氯霉素，并明确规定不能检测出氯霉素的残留量。中国农业部发布了相关公告，明确禁止氯霉素的使用。

（二）氨基糖苷类

抗生素广泛应用于动物养殖，链霉素是主要的抗生素，但长期使用易产生耐药性，对耳、肾等器官造成严重损伤。抗菌素在春天的蜜源中并不常见。夏季，中国养蜂人已经习惯使用I1抗生素。欧盟、美国等国家和地区的食品中，氨基糖苷类抗生素含量不超过100mg/kg~。

（三）磺胺类药物

磺胺类作为一种常用抗生素，在蜂群传染病的防治中发挥着重要作用，但其不良反应非常严重。硫磺胺类药物主要通过肝脏发生代谢失活，形成乙酰化代谢产物，排出尿液。但其代谢产物溶解度低，易沉淀于尿中，造成尿道损伤，并可引起血尿、结晶尿和肾损害。任何一种磺胺类药物，如总磺胺二甲双胍，其总含量均不得超过100ug·kg-1，欧美国家也是如此。

（四）硝基呋喃

硝基呋喃是一种人工合成的广谱抗生素，对细菌、真菌和原生动物都有效。它们能破坏引起蜜蜂感染的细菌的新陈代谢，杀死它们。硝基呋喃类抗生素以呋喃唑酮、呋喃西林、呋喃妥因等为主，但硝基呋喃类抗生素对人体有潜在危害，已被禁用。

（五）其它抗生素

蜂蜜中还含有异丙氨酸、大环脂、羟基甲醛、磷霉素等成分。抗生素残留进入人体后会产生很大的副作用，因此欧盟国家对其进行了严格限制。蜂产品抗生素残留的检测方法主要有微生物法、理化法、免疫法等。它是生物传感器和生物芯片。

二、蜜中抗生素的含量测定

（一）微生物检测

该方法可以根据抗菌药的生理功能和代谢规则，定性或定量地测定抗菌药的残留量，特别包括三苯基三醇氯化物法（TTC法）、圆盘法（PD法）、管小盘法（PD法）等。操作方便，但也存在操作时间长。四小时内，PD的检出限为0.01~0.008iu·ML~(-1)，可达到检测目的。纸切法成本低，时间长，检测结果易出现假阳性，需要对阳性物质进行后处理，以确定是否是待测抗生素。管碟方法是基于扩散的并行量化方法，采用管碟法对生物抗生素进行效价测定和效价分析。由于它的准确度高、直观性、重现性好，因此得到了广泛的应用。但是，在整个检测过程中，决定测试结果的主要原因很多。分别不适当或不注意的手术会导致重大错误，导致整个测试组失败。结果表明，微生物管碟法检测周期长，操作复杂，误差大，但灵敏度高，HPLC检测简便，结果准确，但灵敏度低。传统的抗菌药物检测方法均采用微生物法，该方法成本低，可在一般实验室进行操作。但其缺点是：(1)色彩判断时间过长；(2)肉眼识别色态判断容易出现错误，偏红判断要准确；(3)操作复杂。因此，传统的抗生素残留微生物检测方法已经基本被淘汰。国际上一些大的生物公司对传统的微生物检测方法进行了改进，开发了一种快速检测工具。结论本方法灵敏度高，准确度准确，适用于0.5~1H范围。

（二）理化检验方法

采用HPLC,CC,LC-MS,GC-MS等仪器分析方法对蜂蜜中抗生素残留进行检测(T8~14)。该方法具有灵敏度高，精度高，无误判等优点，但设备昂贵，操作专业，操作繁杂，检测时间长，成本高，难以适应目前设备高速、大型、简单的现状。由于蜂蜜中含有一定量的蛋白质、脂肪和纤维成分，如果不加以处理，就会直接影响到进样结果，从而对色谱柱造成很大的破坏。样品应充分混合，萃取提纯，高速离心脱除纤维等杂质。经过精制的柱子注射，用HPLC-UV分光光度法测定蜂蜜中磺胺类药物残留，回收率为88.00%~111.17%，线性相关系数r>0.9998，测定蜂蜜中磺胺噻唑的含量为0.05mg·L~(1)，测定磺胺二甲氧嘧啶的含量为0.10mg·L~(1)，测定蜂蜜中四环素的含量为0.10mg·L~(1)。四环素检测限为15ug·L-，定量检测限为25ug·kg-。产率在78.85%~82.58%之间，变异系数不超过15%；样品的分离采用固相萃取法和反相液相色谱法。RSD<10%，日间RSD<15%，平均回收率在60%~130%之间。由于样品预处理的复杂性，理化检测方法准确可靠，但不适合现场大量样品的初始筛和高速检测。因此，初次筛选后可以通过理化试验方法进行验证测试。

三、结语

该方法操作简便、快速、设备成本低、检测成本低、专一性强，且需专业人员操作，样品产量大。由于适合大型样品的初步检验，所以很多企业采用氯化抗生素、连锁抗生素、硝基弗兰、四环素、磺胺等。因此，对动物性食品中抗生素残留进行检测具有很大潜力，是未来免疫分析的发展方向之一。如果抗生素残留超标，不仅会给人营养，而且会无意识地危害人类的健康。药物残留是影响人体健康的一个重要因素，它也是目前科研中的热点与难点。

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