不同配比激素浓度对食用稗愈伤组织的影响

作者：杨紫越来源：《北京农业》日期：2015-03-17人气：1653

前言:

食用稗，学名Echinochloa crusgalli (L.) Beauv. var. Frumentacea (Roxb)Wright.,属禾本科稗属中稗的一个变种，是我国古老的谷类作物。食用稗是一年生草本，原产与欧洲和亚洲，主要分布与热带和温带，在我国种植历史2500多年，全国各省均有分布，以北方种植较多。抗逆性强，耐干旱、盐碱、瘠薄，也较耐湿，子实耐贮藏。子粒成熟时容易落粒。是谷类中颖果淀粉最精白的一种粮食作物，茎叶是优良饲草。随着植物分子学的迅猛发展和作为植物生物技术重要组成部分的植物组织培养技术趋于完善，较为困难的禾本科植物的组织培养也找到了可行的途径，此次实验对其成熟胚进行不同浓度梯度激素（6-BA,NAA,L-脯氨酸,酸水解干酪素）的不同时期的培养基的处理，旨在得到最适宜成活愈伤组织的培养基，鉴于禾本科植物的组织培养的发展，扩大禾本科植物中有重要经济价值的植物的研究和开发利用有着一定的意义。

材料与方法：

材料为食用稗自然授粉获得的种子，由华南农业大学农学院刘向东教授提供。

1.食用稗的组织培养

取储藏在25°C恒温箱中的食用稗种子，去掉果皮和桴皮，用75%乙醇浸泡半分钟，无菌水冲洗2-3次，后用0.2%的氯化汞溶液灭菌20分钟，再用无菌水冲洗4-5次后，将种子置于无菌滤纸上，吸干种子表面的水分，直接接到愈伤组织培养皿上。每皿20粒，5皿为一给重复，共四个处理，每处理3次重复。（25±1）°C暗培养室培养，10天为一个周期，统计诱导率。愈伤组织诱导率（%）=产生愈伤组织的外植体数/接种外植体数×100%。

愈伤组织的诱导培养基为N6 + 3.0mg·L-1 2,4-D、30g·L-1蔗糖和8g·L-1琼脂。设计不同浓度梯度的 L-Pro和酸水解干酪素诱导培养基，观察各个浓度梯度的愈伤组织诱导率。

具体见表一

表一

培养基编号 2，4-D浓度/ mgL-1 6-BA浓度/ mgL-1 L-Pro/g 酸水解干酪素/g

Y1 3.0 0 0 0

Y2 3.0 0 0.5 0

Y3 3.0 0 0 0.3

Y4 3.0 0 0.5 0.3

为了解影响愈伤组织增殖的因素，设定了不同浓度激素的的继代培养基。每处理5个皿，每皿接20块愈伤组织，三次重复。观察各个浓度梯度继代培养的愈伤组织诱导率。

具体见表二

表二

培养基编号基本培养基 2，4-D浓度/ mgL-1 6-BA浓度/ mgL-1 L-Pro/g 酸水解干酪素/g

J1 N6 2.0 0 0 0

J2 N6 2.0 0.05 0 0

J3 N6 2.0 0.05 0.5 0

J4 N6 2.0 0.05 0 0.3

J5 N6 2.0 0.05 0.5 0.3

植株分化培养时选择相同诱导培养基中生长较旺盛的愈伤组织，转接到分化培养基上，设定3个基本培养基N6、MS、½MS及对应的不同的生长激素NAA、6-BA的分化培养基，每处理3皿，5个处理，每皿20块愈伤组织，3次重复。（25±1）°C，暗培养室中培养，24h·d-1培养，30d后统计分化的芽数。按公式计算分化率：绿芽分化率（%）=分化出绿芽数（个）/接种愈伤组织块数（块）×100%。

具体见表三。

表三

培养基编号基本培养基 NAA浓度/ mgL-1 6-BA浓度/ mgL-1

F1 N6 0.5 2.0

F2 MS 0.1 0.5

F3 1/2MS 0.5 2.0

F4 1/2MS 0.5 1.0

F5 1/2MS 0.1 0.5

实验结果：

观察了食用稗在不同外源激素浓度配比及不同基本类型诱导、继代、分化培养基条件下的生长状况，诱导率，分化率。

1 食用稗成熟胚愈伤组织的诱导

在基本培养基为N6的诱导培养基上，加0.5g·L-1的L-脯氨酸和加0.3g·L-1的酸水解干酪素10天后的诱导率高于只加0.5g·L-1的L-脯氨酸的诱导培养基，加不同激素的诱导培养基均高于空白对照，说明激素对食用稗成熟胚的愈伤组织形成有正相关作用。

培养基编号	2，4-D浓度/ mgL-1	6-BA浓度/ mgL-1	L-Pro/g	酸水解干酪素/g	诱导率
Y1	3.0	0	0	0	61.11%
Y2	3.0	0	0.5	0	63.89%
Y3	3.0	0	0	0.3	67.22%
Y4	3.0	0	0.5	0.5	68.33%

2 食用稗成熟胚愈伤组织的继代

在基本培养基为N6的诱导培养基上，加设不同浓度配比的 2，4-D和 6-BA，10天后进行统计，发现只添加 2.0mg·L-1 2，4-D，不添加 6-BA的继代培养基的诱导率最高，为84.44%。说明添加高浓度的2，4-D有利于食用稗的愈伤组织分化，而添加6-BA则不利于食用稗愈伤组织的分化形成。

培养基基本培 2，4-D浓度 6-BA浓度 L-Pro 酸水解干酪素编号养基 / mgL-1 / mgL-1 /g /g	诱导率
J1 N6 2.0 0 0 0 J2 N6 2.0 0.05 0 0 J3 N6 2.0 0.05 0.5 0 J4 N6 2.0 0.05 0 0.3 J5 N6 2.0 0.05 0.5 0.5	84.44%
	78.89%
	80.00%
	82.22%
	83.33%

3食用稗成熟胚愈伤组织的分化

比较三种基本培养基N6、MS、½MS，½MS的F1、F2、F3培养基上的绿芽分化率比N6、MS培养基上的食用稗绿芽分化率都高，说明½MS分化培养基更加适合食用稗愈伤组织的绿芽分化。此外激素配比为0.5mg·L-1NAA和2.0mg·L-1 6-BA的F3培养基上愈伤组织的绿芽分化率最高。说明较高浓度的6-BA的培养基愈伤组织的分化能力强。

培养基编号基本培养基 NAA浓度/ mgL-1 6-BA浓度/ mgL-1 分化率

F1 N6 0.5 2.0 82.22%

F2 MS 0.1 0.5 86.67%

F3 1/2MS 0.5 2.0 98.89%

F4 1/2MS 0.5 1.0 97.78%

F5 1/2MS 0.1 0.5 96.67%

参考文献：

王静，张欢欢，傅雪琳，刘向东 2008（06）食用稗成熟胚的组织培养及其细胞学特性.植物生理通讯

王学利，孙世海，王振星，冯峰 2005（04）植物组织培养及其在农业上的应用.天津农业科技

陈微，孙必兴 2001.23（1）：55~61 云南稗属_Echinochloa_植物研究云南大学学报（自然科学版）

邵宏波 12（1）：41~58. Feb.1992 禾本科植物的组织培养研究及其应用广西植物 Guihaia

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