河豚毒素软胶囊的制备工艺及其药效学研究-医学论文

　　河豚毒素（tetrodotoxin，TTX）是一种钠离子通道阻断剂，其毒性虽强，但具有良好的镇痛作用，可以缓解多种钝痛及锐痛，且不产生依赖性，还可用于晚期癌症止痛[1]。软胶囊是现代化新剂型，可提高药物稳定性，相对用药剂量准确，吸收速度优于传统剂型，药物的生物利用度较高[2]。因此，本实验对TTX软胶囊的处方及制备工艺进行单因素考察，并对其药效进行了初步考察。

　　1 仪器与试药

　　1.1 仪器

　　YLS-6A智能热板仪（山东省医学科学院设备站），DF-101K磁力搅拌器（南京科尔仪器设备有限公司）。

　　1.2 试药

　　TTX（江苏泰州市康特生物工程有限公司，批号：000426），司盘（司盘20、司盘60、司盘80，国药集团化学试剂有限公司），紫苏籽油（大连圣基生物制品有限公司），柠檬酸（国药集团化学试剂有限公司），柠檬酸钠（昆山金城试剂有限公司），尼泊金乙酯（上海凌峰化学试剂有限公司），维生素E（南京立业制药有限公司），吲哚美辛（山西云鹏制药有限公司，批号：H14020771）。

　　1.3 动物

　　雌性ICR小鼠，清洁级，体重18~22 g，由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供，动物质量合格证号：SCXK（沪）2007-0005。

　　2 方法与结果

　　2.1 制备工艺的研究

　　2.1.1 增溶剂的选择及用量 选用3种增溶剂（司盘20、司盘60、司盘80），每种增溶剂配制5份，其体积按照软胶囊内容物体积的0.10%、0.15%、0.20%、0.25%、0.30%配制，置于磁力搅拌器中在60℃条件下搅拌，向其中加入蒸馏水，直至搅拌1 h水滴仍无法消失为止，记录此时加入水的体积。由于司盘60所制得的油溶液流动性较差，故只考察司盘20与司盘80的增溶效果。结果表明，司盘80的增溶效果较好，故选择司盘80作为增溶剂，用量为内容物体积的0.20%。见图1。 

　　图1 不同增溶剂对水的增溶曲线 

　　2.1.2 抗氧化剂、防腐剂的选择及用量 配制软胶囊内容物，每个处方含有不同量的维生素E（VE）和尼泊金乙酯，平行两份样品，按照《中国药典》2010版附录ⅪⅩ C“原料药稳定性试验指导原则”，将各样品置于密封具塞试管，并置于恒温箱，在60℃条件下放置10 d，于第0天、第5天和第10天取样，测定过氧化值。结果表明，未加抗氧化剂和防腐剂的处方，过氧化值增幅明显；当VE用量为1.0%、尼泊金乙酯用量为0.2%时，过氧化值较低，故最终确定VE用量为1%，尼泊金乙酯用量为0.2%。见表1。 

　　表1 维生素E、尼泊金乙酯的用量对软胶囊内容物过氧化值的影响

　　2.1.3 搅拌时间的选择 配制3份TTX酸水溶液，方法为精密称取1 mg TTX，用0.2 mL柠檬酸缓冲液（pH=5）溶解，得TTX酸水溶液。分别加入到3个装有1 mL司盘80的烧杯中，在60℃条件下搅拌，经过不同时间后加入一定体积的紫苏籽油，即得TTX紫苏籽油溶液，静置过夜，观察油溶液是否分层。结果显示，当搅拌时间为90 min时，所得的TTX紫苏籽油溶液澄清，未出现分层，故确定搅拌时间为90 min。

　　2.1.4 囊壳处方选择 囊壳处方采用软胶囊常用的明胶-甘油-纯化水配方，明胶、甘油与水的用量比为1.0∶0.3∶1.0[3-6]。

　　2.2 小鼠热板法镇痛试验

　　调节热板仪温度，使其恒定在（53±0.5）℃，每次取雌性小鼠1只，放入热板仪，记录自放入热板仪至出现舔后足所需时间，作为该鼠的痛阈值，凡少于6 s或超过60 s出现舔后足者弃之不用。取预选合格的小鼠50只，随机分为5组，每组10只：溶媒对照组、吲哚美辛组（20 mg/kg）、TTX软胶囊高剂量组（32 μg/kg）、TTX软胶囊中剂量组（16 μg/kg）和TTX软胶囊低剂量组（8 μg/kg），测定每只小鼠灌胃2 h后的痛阈值，计算痛阈提高率。见表2。

　　3 讨论

　　TTX易溶于稀酸水溶液，本实验选用常用的柠檬酸缓冲液（柠檬酸、柠檬酸钠）作为TTX的溶剂。当溶剂pH值小于3时，TTX容易降解为脱水TTX[7]，因此pH值定为4～6较为合适，本实验选用pH值为5的柠檬酸缓冲液溶解TTX，结果显示效果良好。

　　由小鼠热板法镇痛试验结果显示，本方法制得的TTX软胶囊具有良好的镇痛效果，且随着剂量的增加，痛阈提高率越大，镇痛效果越好。