浅谈如何制作优质的薄层液基细胞制片——生物论文

一、制片材料与方法

1.1 制片材料

    制片材料主要有：毛刷、保存瓶、玻片、离心管、离心机、细胞粘附剂、、染色架、染色

槽、100%酒精、PBS 缓冲液、苏木素染液、EA/OG 染液、二甲苯、盖玻片、中性树胶[1]。

1.2 制片方法

第一，用毛刷插入宫颈管，并抵住宫颈外口，顺时针方向转圈3至5圈，然后取出刷头放入细胞保存液中。

第二，收集标本并振荡标本瓶，然后用细胞粘附剂涂匀玻璃片，并置于37度的恒温箱中进行干燥。

第三，取适当的保存液均匀方置于与离心管内，并确保编号一致。

第四，将离心过后的上清液导入对应编号的保存液中，然后充分振荡以保证离心管内的细胞均匀。

第五，用吸管吸取适量的稀释后的保存液，然后将其放置于模具中，并开始甩片。

第六，甩片完成后，取出玻片并置于95%酒精中进行固定，固定时间约为十分钟。

第七，用快速巴氏染色剂对50张玻片进行染色。

第八，从固定液中取出玻片，并放置于玻片板上进行吹干，然后采用中性树胶对其进行干封。

二、结果

    对已制作完成的50例薄层液基细胞制片进行分析后，薄层液基细胞制片颜色清晰、 厚度均匀、无非特异性染色装，这有效提高了医生工作效率。

三、讨论

a，采集方法

    收集医院就诊患者的液基细胞，将其放入保存液中，并保证保存瓶是干净的以及保存瓶的编号一致，以防液基细胞与保存液不一致，进而影响医生诊断。

b，保存液固定

    完成甩片后，医生应将模具打开，并取出专用的玻片，然后将其放置于95%酒精内进行固定，其中，固定时间约为十分钟。在此过程中，医生应拆下一次性的过滤膜，并放置于专用的医疗垃圾同种，并用流动水清洗玻璃模具[3]。

c，制片过程和注意事项

    制作优质的薄层液基细胞制片的过程主要有：一，振荡，按编号将标本瓶放在振荡器上。振荡时间宜一分钟左右，这有利于保存液中的细胞均匀。二，离心，取适当的保存液均匀方置于与离心管内，并确保编号一致。三，稀释，将离心过后的上清液导入对应编号的保存液中，然后充分振荡以保证离心管内的细胞均匀。在稀释液体时，应该按照细胞量的多少进行稀释，并将稀释后的液体存放与保存液中[4]。在稀释过程，医生应注意细胞不可过多，过量的细胞容易导致涂片过厚，进而影响境下诊断。四，甩片，用吸管吸取适量的稀释后的保存液，然后将其放置于模具中，并开始甩片。甩片一般设置为1300转，制作时间大约为2至4分钟。五，固定，甩片完成后，取出玻片并置于95%酒精中进行固定，固定时间约为十分钟。六，染色，用快速巴氏染色剂对50张玻片进行染色[5]。七，封片，从固定液中取出玻片，并放置于玻片板上进行吹干，然后采用中性树胶对其进行干封。

d，制片后95%酒精固定

    完成保存液甩片后，取出适量的玻片并置于95%酒精中进行固定，固定时间约为十分钟。在固定的过程中，医生应拆下一次性的过滤膜，并放置于专用的医疗垃圾同种，并用流动水清洗玻璃模具。

e，H-E染色，封片

    在具体染色过程中，核染液宜染色一分钟左右，流动水冲洗时间为1分钟左右，其中浆染液宜染色一分钟左右，添加增色液的时间约为10分钟，最后，固定液宜采用100%的酒精，时间为2分钟左右[6]。

    从固定液中取出玻片，并放置于玻片板上进行吹干，然后采用中性树胶对其进行干封。在封片的过程中，医生应注意玻片质量，并保证玻片表面的清洁[7]。封片完成后，确保无气泡和树胶渗出。一旦有气泡和树胶渗出，这将影响医生的诊断。

【参考文献】

[1] 曹婉维，王晓鸿，郑燕璇.制作优质 LCT 液基细胞片的方法与探讨[J].中国实用医药，2011，6（21）:46.

[2] 张西海.薄层液基细胞在宫颈病变中的应用[J].黔南民族医专学报，2012，25（1）:21.

[3] 陶玉，何松，吉志固.液基细胞学技术在非妇科标本中的应用体会[J].临床与实验病理学杂志，2009，25（5）:559.

[4] 曹婉维，王晓鸿，郑燕璇.制作优质 LCT 液基细胞片的方法与探讨[J].中国实用医药，2011，6（21）:46.

[5] 宋丽君，魏波，李英勇.薄层液基细胞学筛查宫颈病变及 HPV感染的价值[J].中国现代医学杂志，2008，18（1）:122.

[6] 龙志贤，刘专科.薄层液基细胞筛查宫颈病变的临床价值[J].中外医疗，2009，6（16）:8.

[7]欧陵斌，杨晓斌，柏彬，鲁君艳，朱宏健.4种液基细胞制片的比较[J].临床与实验病理学杂志，2013，29（4）：457.