绞股蓝皂苷对大鼠抗氧化及免疫功能的影响

绞股蓝又被称为七叶参、甘茶曼，含有大量的绞股蓝皂苷、氨基酸、蛋白质、黄酮类、糖类、维生素等，其中的绞股蓝皂苷是其药效的主要组成部分，使得绞股蓝具有很好的抗氧化和衰老，增强机体免疫能力，抵抗肿瘤、心血管缺氧缺血及脑组织缺氧，保护肾脏、肝脏等之效，进而使得其成为一种有效的抗衰老、增强免疫、抗肿瘤的天然中药材。再加上，当前生物学、医药学、免疫学等众多学科的快速发展，使得通过天然中药材来实现抗衰老和增强免疫能力成为可能，本文就是在此背景下对绞股蓝皂苷进行详细的探索，着重探索其在抗氧化、降低衰老，增强免疫能力方面的效果，并进行如下详细的报告：

1 资料与方法

1.1 一般资料

50只Wistar大鼠为研究样本。将大鼠饲养两周后平均分成五组，并分别命名为A、B、C、D、E组。

1.2 试验方法

在各组大鼠自由饮食和饮水的基础上，A、B、C、D四组大鼠于颈背皮下每只每天一次按照125mg/kg剂量注射0.1ml的D-半乳糖；A、B、C三组大鼠每只每天一次按照180mg/kg、120mg/kg、60mg/kg剂量灌胃绞股蓝总皂苷水2ml；D组大鼠每只每天一次按照2ml剂量的生理盐水进行灌胃；E组大鼠每只每天于颈背皮下分别按照0.1ml、2ml剂量进行注射和灌胃生理盐水；在实验的第三十天，进行眼球取血，剖检取心脏、脑组织并快速匀浆，制成组织匀浆液，用于各项指标的检测。

1.3 实验药物和试剂

绞股蓝皂苷（98%）；肝素钠、细胞培养液和四甲基偶氮唑盐；大鼠淋巴细胞分层液；姬姆萨-瑞士染色液；小牛血清；超氧化物歧化酶、谷胧甘肤过氧化物酶、丙二醛、过氧化氢酶、总抗氧化能力、一氧化氮试剂盒。

1.4 检测指标及方法

1.4.1 大鼠抗氧化检测指标

采用DTNB显色法、黄嘌呤氧化酶法、可见光法、硫代巴比妥酸法、硝酸还原酶法和菲林络合法测定大鼠谷胧甘肤过氧化物酶、超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、丙二醛、一氧化氮和总抗氧化能力等抗氧化指标的检测。

1.4.2 大鼠免疫功能影响指标

大鼠免疫器官指数、白细胞数量、吞噬细胞功能和外周血液T淋巴细胞转化率来测定其免疫功能效果

1.5 统计学分析

采用SPSS17.0软件对数据进行分析和处理，计量资料用t检验，组间资料用检验，计数资料用检验，以P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 绞股蓝皂苷对大鼠抗氧化功能的影响结果

2.1.1 大鼠血清和组织谷胧甘肤过氧化物酶活力结果：根据记录的结果分析可以看出，D组比A、B、C、E组血清和组织中的谷胧甘肤过氧化物酶活性增强的更为显著，且B组的活力提高程度最大，与E组接近，详见表一。

表1 绞股蓝皂苷对各组大鼠谷胧甘肤过氧化物酶影响结果

项目	E组	A组	B组	C组	D组
血清	449.6±9.4b	429.3±5.4b	431.3±7.6b	423.3±9.9b	379.8±10.6
脑	76.9±4.8b	69.5±3.8b	74.7±2.1b	69.9±3.6b	58.9±3.4
组织	267.6±9.4b	250.6±10.4b	255.6±12.4b	244.3±7.3b	209.3±5.3b

注：B代表各组对比差异显著，b代表差异极其显著，以下各表相同。

2.1.2 大鼠血清和组织超氧化物歧化酶活力结果：与E组相比较来说，A、B组血清和组织中的超氧化物歧化酶活力明显增强，C组增强程度最低，D组与其相差不大，详见表二。

 

表2 绞股蓝皂苷对各组大鼠超氧化物歧化酶活力影响结果

项目	E组	A组	B组	C组	D组
血清	120.6±4.4b	114.3±6.4B	118.3±4.6b	113.3±9.9B	106.8±6.6
脑	169.9±8.8b	165.5±8.8B	168.7±12.1b	159.9±11.6	151.9±6.4
组织	234.6±4.4b	235.6±7.4b	240.1±6.4b	237.3±10.9b	216.3±5.3

2.1.3 大鼠血清和组织过氧化氢酶活力结果：较之于E组，A、D组过氧化氢酶活力极其明显增强，C组差异明显增强，B组不明显，详见表三。

表3 绞股蓝皂苷对各组大鼠过氧化氢酶活力影响结果

项目	E组	A组	B组	C组	D组
血清	14.6±1.4b	12.0±1.4b	13.3±1.6b	11.3±1.3B	8.8±1.6
脑	14.9±0.8b	13.2±1.8b	14.7±0.9b	12.2±1.6B	9.5±1.4
组织	11.6±1.4b	10.6±0.9b	11.1±1.4b	10.3±1.2B	7.9±1.3

2.1.4 大鼠血清和组织丙二醛测定结果：较之于E组，B组丙二醛显著增强，存在极其差距的差异，A组显著差异，C、D组不明显，详见表四。

表4 绞股蓝皂苷对各组大鼠丙二醛含量影响结果

项目	E组	A组	B组	C组	D组
血清	3.6±0.4B	3.8±0.6B	3.3±0.6b	3.5±0.6B	4.4±0.6
脑	7.9±0.6b	9.2±0.8	8.2±0.9b	8.4±0.4B	10.1±0.4
组织	8.6±1.0b	9.1±0.9B	8.6±1.4b	9.3±1.2	10.8±0.3

2.1.5 大鼠血清和组织一氧化氮测定结果：较之于E组，B组一氧化氮显著降低，差异极其明显，且与D组相当，C组不明显，详见表五。

表5 绞股蓝皂苷对各组大鼠一氧化氮含量影响结果

项目	E组	A组	B组	C组	D组
血清	10.3±0.4b	11.5±0.6B	10.6±0.6b	11.7±0.3B	13.4±0.6
脑	4.2±0.2B	4.8±0.6	4.3±0.3B	4.7±0.6	5.4±0.6
组织	1.6±0.4B	1.4±0.7B	1.1±0.5b	1.5±0.6	2.4±0.3

2.1.6 大鼠血清和组织总抗氧化能力结果：较之于E组，B组总抗氧化能力显著增强，差异极其显著，D组差异极显著，C组心脏和A组脑组织中无显著差异，详见表六。

表6 绞股蓝皂苷对各组大鼠总抗氧化能力影响结果

项目	E组	A组	B组	C组	D组
血清	8.3±0.2B	8.2±0.2B	8.9±0.5b	8.2±0.2B	7.4±0.4
脑	2.8±0.2b	2.2±0.1	3.3±0.1b	3.1±0.1b	2.4±0.2
组织	4.4±0.3B	4.4±0.2b	4.5±0.3b	4.1±0.3	3.8±0.3

2.2 绞股蓝皂苷对大鼠免疫功能的影响结果

绞股蓝皂苷对大鼠免疫功能各指标影响结果分析:与E组相比，A、B、D组的胸腺、脾脏指数明显提高，A、B、D组的白细胞数量明显增加，具有极显著差异，C组无显著差异；A、B组吞噬细胞吞噬率明显增加，差异极显著，C、D组有显著差异；B组外周T血淋巴细胞转化率明显提高，差异极显著，A、D组有显著差异，C组无明显差异，详见表七。

表7 绞股蓝皂苷对各组大鼠免疫功能各指标影响结果

项目	E组	A组	B组	C组	D组
胸腺	2.2±0.2b	2.3±0.4b	2.3±0.1b	2.1±0.1	2.0±0.1
脾脏	3.5±0.2B	3.4±0.1B	3.4±0.1b	3.2±0.1	3.1±0.1
白细胞	10.9±0.6B	10.8±0.5B	11.6±0.9b	10.1±0.8	9.5±0.9
吞噬率	46.3±3.6B	47.1±3.0b	47.3±3.5b	46.1±2.8B	41.5±1.4
刺激指数	1.3±0.1B	1.2±0.1B	1.3±0.2b	1.1±0.2	1.0±0.1

3 讨论

3.1 绞股蓝皂苷对大鼠抗氧化功能讨论

在绞股蓝皂苷对大鼠抗氧化功能的影响方面采用了D-半乳糖诱导大鼠产生亚急性衰老反应构建大鼠衰老模型来具体研究其在抗衰老方面的表现。自由基是机体代谢过程中产生的内源性物质，正常情况下发挥着灭菌、调节免疫等作用，机体发生病变时，自由基含量会显著增加，产生超氧化反应，改变机体细胞结构和功能，导致免疫力下降、肿瘤和炎症等发生，而动物体内包含着氧化物歧化酶、谷胧甘肤过氧化物酶、过氧化氢酶等可以有效清除自由基的抗氧化酶系统，而丙二醛作为自由基脂质氧化反应的产物，可以很好的反应机体脂质过氧化作用和细胞功能受损程度，具体来说：

（1）谷胧甘肤过氧化物酶是机体普遍存在的催进过氧化氢分解的重要的酶类，并使有害的过氧化物还原为无害的羟基化合物来保护机体生物膜不受过氧化损害，起到抗氧化作用。而绞股蓝皂苷可以通过提高机体细胞免疫功能，抑制脂质过氧化物的生成，来提高其谷胧甘肤过氧化物酶活力，进而提高机体抗氧化能力。

（2）超氧化物歧化酶作为机体重要的抗氧化酶之一，主要通过对超氧化物阴离子自由基转变为过氧化氢和氧离子反应的促进作用来减少机体脂质过氧化反应，保护机体细胞和组织免受损害，同时，其清除自由基能力会随着年龄的增长而降低，也是它成为衰老的一个主要标志。医学界大量文献和实验已经证明绞股蓝皂苷能有效的增强衰老大鼠血清和心肌超氧化物歧化酶活力，并改善缺血心肌的收缩性能，缩小梗死面积，增强心肌和组织内超氧化物歧化酶活力。

（3）正常代谢情况下，机体会产生少量的含氧自由基不仅不会对机体产生伤害，还能起到杀菌和调节免疫作用，并通过体内的抗氧化酶和抗氧化剂清除出体外，只有机体病变，体内抗氧化酶活性下降时，过多的氧自由基不能及时被清除并排出体外，这才导致其与机体生物大分子发生反应，并生成大量过氧化物，进而造成体积细胞和组织运行的障碍。过氧化氢酶可以将其有效的直接分解，并降低其浓度，进而保护机体细胞的稳定和正常运行。而不同剂量的绞股蓝皂苷可以对过氧化氢酶活性的增强起到不同程度的作用，进而帮助其发挥作用。

（4）机体的氧自由基可以攻击生物膜中的多不饱和脂肪酸来引发脂质过氧化反应，生成脂质过氧化物，这种过氧化反应和脂质过氧化物会引起机体细胞的损害。丙二醛作为机体内氧自由基代谢中的脂质氧化物，可以有效的反应机体脂质过氧化自由基的发生与否和发生及损害程度如何。而绞股蓝皂苷可以有效地抑制机体丙二醛的生成，降低其含量和浓度，提高机体对抗自由基氧化反应引起的组织和细胞损害，进而增强机体清除自由基、抗氧化能力。

（5）当一氧化氮浓度和含量很低时，不仅可以依靠自身的毒性起到杀菌作用，还可以通过吞噬细胞的激活实现有害物质的清除，更能与机体其它分子配合作用使病毒细胞无法生长；当含量过高时，会加剧免疫病理过程，损害组织，诱发基因突变和肿瘤等产生；当浓度很高时，会增加机体自由基，加重氧化应激反应。绞股蓝皂苷可以有效地抑制机体一氧化氮的升高，减少其释放，并很好的抑制诱生型一氧化氮合成酶，提高机体抗衰老能力。

（6）机体总抗氧化能力的强弱与其健康程度密切相关，通过抗氧化体系可以有效地清除自由基和活性氧，避免机体发生脂质过氧化反应，还可以通过过氧化物的分解，切断氧化反应链条，有着重要的意义。。

3.2 绞股蓝皂苷对大鼠免疫功能影响的讨论

机体大部分免疫细胞多分布于胸腺和脾脏内，使得胸腺和脾脏成为机体重要的免疫器官。通过胸腺和脾脏重量指数的测量可以在很大程度上反应机体免疫器官内淋巴细胞数量，帮助了解和掌握机体免疫能力。绞股蓝皂苷能增加大鼠的脾脏、胸腺重量明显增加，这表明绞股蓝皂苷能有效的提高机体免疫指数。

  （2）白细胞是机体免疫系统的重要组成部分可以有效的抵抗外来病原体的侵入，对侵入机体的病原体起到吞噬和破坏作用，进而参与到机体非特异性免疫的过程，并起到重大作用。一般来说，当白细胞总数减少时机体对病原体的免疫和抵抗能力也会降低。绞股蓝皂苷可以有效的提高机体白细胞含量。

（3）吞噬细胞是机体吞噬系统的重要组成部分，在非特异性免疫中发挥重要作用，可以很好的吞噬机体异物，处理抗原，而绞股蓝中草药可以增强吞噬细胞和其吞噬能力促进该功能的发挥，不仅能非特异性的吞噬侵入机体的病原体和异物，还能将病原体呈现给T、B淋巴细胞，进而参与到机体的特异、非特异性的免疫系统。使用绞股蓝皂苷组大鼠的吞噬细胞指数和百分率明显提高，说明绞股蓝皂苷可以很好的增强机体吞噬功能，提高机体免疫力。

（4）细胞免疫是T淋巴细胞介导的重要机体免疫反应，可以抵抗细胞内微生物感染，并促进破坏或溶解感染微生物细胞的产生和效用发挥。T淋巴细胞是介导组织免疫的重要细胞，来源于骨髓造血干细胞，主要分布于淋巴结、脾脏等外周免疫器官和血液，并依赖胸腺完成分化和成熟，可以很好的反应机体细胞免疫状况。而绞股蓝皂苷可以有效地增加T淋巴细胞数量，并对其免疫功能的发挥起到很好的促进作用。

参考文献

[1]金亭亭,孙兆林,江蔚新. 绞股蓝化学成分及药理作用研究进展[J]. 亚太传统医药,2014,16:30-32.

[2]于文会,王坤,戈胜. 绞股蓝总皂苷对衰老大鼠抗氧化功能的影响[J]. 中国兽医杂志,2010,01:40-41.

[3]周石琼. 绞股蓝多糖对小鼠胸腺和脾脏影响的研究[D].广西大学,2012.