外周血淋巴细胞筛选敏感抗肿瘤药物临床应用的可行性研究

    有效治疗肿瘤是医学上一个重要的课题，通常医学上对于治疗肿瘤患者采用化疗的方法，化疗能对肿瘤细胞的扩散具有一定的抑制作用，但是多次化疗后，对于肿瘤扩散的抑制作用就比较小了。这是因为患者身体内的肿瘤细胞对于化疗药物产生了一种耐药性。耐药性是病变体对化疗药物产生的一种耐受性，会降低药物的疗效。医学上会寻找一些和肿瘤细胞具有相似性的细胞进行抗肿瘤药物的筛选，外周血淋巴细胞是一种和肿瘤细胞具有很大相似性的细胞，因此医学上会使用外周血淋巴细胞进行敏感性试验。文章对外周血淋巴细胞对抗肿瘤药物的敏感进行研究，报告如下。

一、资料和方法

1.1临床资料

    选取我医院在2011年7月~2012年1月的40例确诊的肿瘤细胞患者，其中男性患者有25例，女性患者有15例，所有患者中年龄最低为55岁，最高为78岁，平均年龄在69±9.7岁。在这40例患者中，有大肠癌11例，胃癌11例，食管癌9例，膀胱癌7例，肺癌2例。所有患者此前均未进行过化疗治疗。

1.2准备药物

    此次实验需要准备的抗肿瘤药物有8种，分别为表阿霉素、卡铂、顺铂、威猛、长春新碱、环磷酰胺、盖诺、氨甲喋呤[1]。对这些药物进行调配，其中表阿霉素800g/ml、卡铂400g/ml、顺铂800g/ml、威猛80g/ml、长春新碱10g/ml、环磷酰胺500g/ml、盖诺60g/ml、氨甲喋呤400g/ml。

1.3准备试剂和器材

    准备好需要用到的试剂和器材，试剂有胰蛋白酶、青霉素、淋巴细胞分离液、MTT、链霉素、血清、二甲基亚砜。器材有酶联免疫检测仪、显微镜、CO2孵箱。

1.4研究方法

    先将外周血通过淋巴细胞分离液分离出外周血淋巴细胞，再将患者体内的肿瘤细胞进行分离，用生理盐水对肿瘤组织进行清洗好后放入胰蛋白酶进行消化，制成单细胞悬液。将细胞数调整为适合孔板的数目。这样就制成了外周血淋巴细胞悬液和肿瘤细胞悬液。将细胞悬液分成ABC三组，A组为淋巴细胞悬液、抗癌药物、培养液调配液，分别为100L/孔、10L/孔、90L/孔；B组为淋巴细胞悬液和培养液的调配液，均为100L/孔；C组为单纯的培养液200L/孔。这三组调配液存放的孔板要加入CO2孵箱，在37.5℃的环境下培养48小时，并使用显微镜观察细胞培养的动态。最好要用MTT进行检测，对外周血淋巴细胞对抗肿瘤药物的敏感性进行计算。

1.5细胞抑制率的计算

    对细胞培养液去掉上清后，用二甲基亚砜停止反应，用酶联免疫检测仪检测OD值。

细胞抑制率=（1-加药组平均OD值/对照组平均OD值）×100%[2]。

1.6评判标准

    如果细胞抑制率≥50%则为具有高敏感性，30%~50%则为敏感，＜30%则为不敏感，即具有抗药性。

1.7统计学分析

    将所有数据进行收集，并采用SPSS13进行处理。数据的相关性分析则采用直线相关分析研究。

二、结果

    经过实验可知，在这8种抗肿瘤药物中，表阿霉素、威猛、盖诺和环磷酰胺这4种抗肿瘤药物对患者的肿瘤细胞抑制率和对外周血淋巴细胞的抑制率具有正相关的关系，两者的相关性明显，细胞抑制率分别为0.563、0.685、0.324、0.528；氨甲喋呤、顺铂、长春新碱和卡铂这4种抗肿瘤药物对患者的肿瘤细胞抑制率和对外周血淋巴细胞的抑制率关系不明显，细胞抑制率分别为0.121、0.258、0.176、0.068。

三、讨论

    从实验可知，外周血淋巴细胞进行筛选敏感抗肿瘤药物具有一定的可行性。

    在肿瘤和癌症的治疗中，通常会使用化疗手段进行治疗，化疗能对肿瘤细胞的扩散具有一定的抑制作用，但是常常会发生患者进行多次化疗后，化疗对于肿瘤扩散的抑制作用越来越小的情况。这是由于患者身体内的肿瘤细胞对于化疗药物产生了一种耐药性。而耐药性就是体内病变体对化疗药物产生的一种耐受性，它会降低药物的疗效。医学上会采用和肿瘤细胞具有相似特性的身体细胞进行对抗肿瘤药物敏感性的测试，以便筛选更具有疗效的抗肿瘤药物进行治疗，外周血淋巴细胞就是医学上用来进行敏感抗肿瘤药物的筛选。

    外周血淋巴细胞对不同的抗肿瘤药物具有不同的敏感性，但无法对所有的抗肿瘤药物具有很强的敏感性，因此外周血淋巴细胞通常在很难获取肿瘤细胞的情况下可以代替肿瘤细胞对药物的敏感性进行测试，间接来估计肿瘤细胞对药物的敏感性。

    MTT是医学上用来对细胞的生长情况进行检测的一种方法，它主要是通过活细胞中的酶还原出晶体沉积在细胞中，并用酶联免疫检测仪来检测光吸收值。晶体的数量能够间接反映活细胞的数量。它具有方便高效、经济实惠的优点，因此在医学上广泛使用。

    综上所述，外周血淋巴细胞对于筛选敏感抗肿瘤药物虽然不完全有效，但具有一定的参考价值。目前的医学还未发现可以完全替代肿瘤细胞进行对抗肿瘤药物进行敏感性检测的人体细胞，因此外周血淋巴细胞对于医学上筛选敏感抗肿瘤药物临床应用具有很大的作用和意义。

【参考文献】

[1]朱仲丽. 人外周血淋巴细胞亚群抗肿瘤效应的研究[D].泰山医学院,2012. 

[2]刘晶,魏文青,张艳,杨梦迪,赵满仓. 肿瘤患者外周血淋巴细胞和肿瘤组织对化疗药物敏感性的比较[J]. 中国误诊学杂志,2011（02）:258-260.